皮膚致敏實驗報告中科院上海分院
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1 范圍

GBZ/T240的 奪 部分 規(guī)定 了動物 皮膚 致 敏試 驗 的 目的、試 驗 概 述 、試 驗 方法 、評 價 報 告 和結(jié) 果

解釋 。

本部分適用于檢測化學(xué)品對皮膚 的變態(tài)反應(yīng)性 。

2 規(guī)范性 引用文件

下列文件對于本文件 的應(yīng)用是必不可少的。凡是注 日期 的引用文件 ,僅所 注 日期 的版本適用 于本

文件 。凡是不注 日期 的引用文件 ,其 最新版本 (包 括所有 的修改單)適用于本文件 。

GBZ/T224 職業(yè)衛(wèi)生名詞術(shù)語

GBZ/T240.1 化學(xué)品毒理學(xué)評價 的程序和試驗方法 第 1部分 :總 則

3 術(shù)語和定義

GBZ/T240.1界定 的術(shù)語和定義適用于本文件 。

3.1

誘導(dǎo)接觸 Ⅱduct二 on exposure

機體通過接觸受試樣品以達(dá)到誘導(dǎo)產(chǎn)生過敏狀態(tài)目的的試驗性暴露。

3∶ 2 ∷

誘 導(dǎo) 期 induction period

機體通過接觸受試樣品而誘導(dǎo)出過敏狀態(tài)所需的時間。

3.3

犭次犭乏招艮角蟲 chaⅡenge exposure

機體接受誘導(dǎo)暴露后 ,再 次接觸受試樣品的試驗性暴露 ,以 確定皮膚是否會 出現(xiàn)過敏反應(yīng) 。

4 試驗 目的

確定重復(fù)接觸化學(xué)品對哺乳動物是否可引起皮膚變態(tài)反應(yīng)及其程度 。

5 試驗橛述

實驗動物通過多次皮膚涂抹誘導(dǎo)接觸受試樣 品 Od、 7d、 14d(誘 導(dǎo)期 )后 ,給 予激發(fā)劑量 的受試樣

品 ,觀察實驗動物 ,并 與對照動物 比較對激發(fā)接觸受試樣品的皮膚反應(yīng)強度 。

6.4.2 豚鼠最大反應(yīng)試驗 (Guinea Ⅱg Maximization Test,GPMT)

采用完全福 氏佐劑 (Freund Complete A曲 vant,FCA)皮 內(nèi)注射方法檢測致敏的可能性 。

6.4.2.1 動物數(shù)

試驗組至少用 10,對 照組至少 5只 。如果試驗結(jié)果難 以確定受試樣 品的致敏性 ,應(yīng) 增加動物數(shù) ,試

驗組 20只 ,對 照組 10只 。

6.4.2.2 劑量水平

試驗劑量水平可以通過少量動物 (2只 ~3只 )的 預(yù)試驗獲得 。誘導(dǎo)劑量為能足 以引起皮膚輕度刺

激反應(yīng) 的濃度 ,激 發(fā)劑量為不能引起皮膚刺激作用 的最高劑量 。

6.4.2.3 試驗步驟

6.4.2.3.1 誘導(dǎo)接觸 (第 0天)

誘導(dǎo)接觸應(yīng)按如下步驟操作 :

a) 受試樣品組 :將 頸背部去毛區(qū)(2cm× 4cm)中 線兩側(cè)劃定三個對稱點 ,每 點皮 內(nèi)注射 0.1mL

下述溶液 。

第 1點 1:1(體積 比)FCA/水或生理鹽水 的混合物 ;

第 2點 耐受濃度 的受試樣品 ;

第 3點 用 1:1(體 積 比)FCA/水 或生理鹽水配制的受試物 ,濃度與第 2點 相同。

b) 對 照組 :注 射部位 同受試樣 品。

第 1點 1:1(體積 比)FCA/水或生理鹽水 的混合物 ;

第 2點 未稀釋的介質(zhì) ;

第 3點 用 1:1(體 積 比)FCA/水 或生理鹽水配制的質(zhì)量濃度為 50%的介質(zhì) 。

6.4.2.3.2 誘導(dǎo)接觸(第 7天)

將涂有 0.5g(mD受試樣 品的 2cm× 4cm濾紙敷貼在上述再次去毛 的注射部位 ,然 后用兩層紗

布 ,一 層玻璃紙覆蓋 ,無刺激膠布封閉固定 48h。 對無皮膚刺激作用 的受試樣品 ,可 加強致敏 ,于 第二次

誘導(dǎo)接觸前 24h在注射部位涂抹 10%十 二烷基硫酸鈉 (SLS)0.5mL。 對照組僅用介質(zhì)作誘導(dǎo)處理 。

6.4.2.3.3 激發(fā)接觸 (第 21天 )

將豚 鼠軀干部去毛 ,用 涂有 0.5g(mL)受 試樣 品的 2cm× 2cm濾 紙片敷貼在去毛 區(qū),然 后再用兩

層紗布 ,一 層玻璃紙覆蓋 ,無 刺激膠布封閉固定 24h。 對照組動物作 同樣處理 。如激發(fā)接觸所得結(jié)果不

能確定 ,可 在第一次激發(fā)接觸一周后進(jìn)行第二次激發(fā)接觸 。對照組作 同步處理 。

6.4.2.3.4 觀察及結(jié)杲評價

激發(fā)接觸結(jié)束 ,除 去涂有受試樣品的濾紙后 24h、 48h和 72h,觀察皮膚反應(yīng) (如 需要清除受試殘 留

物可用水或選用不改變皮膚 已有反應(yīng)和不損傷皮膚 的溶劑),按 表 3評分 。當(dāng)受試樣 品組動物皮膚反應(yīng)

積分≥1時 ,應(yīng) 判為皮膚致敏反應(yīng) 陽性 ,按 表 2對受試樣 品進(jìn)行致敏強度分級 。

表 3 皮膚致敏反應(yīng)試驗評分標(biāo)準(zhǔn)

反 應(yīng)                                                        評 分

無反應(yīng)                                                        0

散在或小塊紅斑                                          1

中度彌漫的紅斑 、輕度水腫                        2

嚴(yán)重 的紅斑 、水腫                                      3

7 評價報告

除 GBZ/T240.1規(guī) 定的一般項 目外 ,評 價報告還應(yīng)包括以下方面 :

a) 陽性試驗信息 ,包 括陽性對照物 1試驗方法和試驗時間;

ω 評分等級系統(tǒng)的簡要描述 ;

o 誘導(dǎo)和激發(fā)使用的介質(zhì) ,如 果不是水和生理鹽水 ,說 明使用的理 由。任何可能與受試樣品反

應(yīng) `或 增強、或妨礙吸收的原料均應(yīng)報告 ;

d) 誘導(dǎo)和激發(fā)使用受試樣品的總量 ,每 次使用的技術(shù) ;

o 結(jié)論 。

8 結(jié)果解釋

試驗結(jié)果應(yīng)能得出受試樣品的致敏能力和強度 ,這 些結(jié)果只能在很有限的范圍內(nèi)外推到人類 。