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Western及IP細(xì)胞裂解液

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品　　牌：

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出廠(chǎng) 價(jià)：
220

主要規(guī)格：
100ml

用　　途：

Western及IP細(xì)胞裂解液產(chǎn)品編號(hào): P1001 產(chǎn)品包裝: 100ml 產(chǎn)品價(jià)格: 220.00元我們生產(chǎn)的Western及IP細(xì)胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP)，是一種在非變性條件下裂解細(xì)胞的裂解液。本細(xì)胞裂解液裂解的細(xì)胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。 Western及IP細(xì)胞裂解液的主要成分為20mM Tris(pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多種抑制劑?？梢杂行б种频鞍椎慕到猓⒕S持原有的蛋白間相互作用。用Western及IP細(xì)胞裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質(zhì)，不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。包裝清單：產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱(chēng) 包裝 P1001 Western及IP細(xì)胞裂解液 100ml PMSF（100mM） 1.5ml 說(shuō)明書(shū) 1份保存條件： -20℃保存，一年有效。注意事項(xiàng)：為取得最佳的使用效果，盡量避免過(guò)多的反復(fù)凍融?？梢赃m當(dāng)分裝后使用。裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。關(guān)于裂解液的選擇，一方面可以參考我們生產(chǎn)的各種裂解液主要特點(diǎn)、差異，選擇合適的裂解液；另一方面也需要通過(guò)一些預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)摸索最佳的適合您實(shí)驗(yàn)條件的裂解液。為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。使用說(shuō)明：對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品： 1. 融解Western及IP細(xì)胞裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。 2. 對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對(duì)比較容易裂解充分。 3. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。裂解液用量說(shuō)明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入100微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150微升或200微升。對(duì)于組織樣品： 1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。 2. 融解Western及IP細(xì)胞裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。 3. 按照每20毫克組織加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。) 4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。 5. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。附：我們生產(chǎn)的各種裂解液主要特點(diǎn)、差異和選擇首先請(qǐng)參考下表，了解各種裂解液的主要特點(diǎn)和差異。產(chǎn)品編號(hào) P1001 P1002 P1004 P1006 P1010 P1012 產(chǎn)品名稱(chēng) Western及IP細(xì)胞裂解液 RIPA裂解液(強(qiáng)) RIPA裂解液(中) RIPA裂解液(弱) NP-40裂解液 SDS裂解液有效裂解成分 1% Triton X-100 1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS 1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS 1% NP-40,0.25% deoxycholate 1% NP-40 1% SDS 裂解強(qiáng)度溫和強(qiáng) 中溫和溫和強(qiáng) 對(duì)膜蛋白的提取一般很好較好一般一般很好對(duì)胞漿蛋白的提取很好很好很好很好很好很好對(duì)核蛋白的提取較好很好較好較好較好很好胞漿磷酸化蛋白提取很好很好很好很好很好很好細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子提取很好很好很好很好很好很好含蛋白酶抑制劑是是是是是是含磷酸酯酶抑制劑是是是是是是主要用途 WB, IP,co-IP WB, IP WB, IP WB, IP, co-IP WB, IP,co-IP WB, ChIP 用于普通的Western、IP或co-IP，我們推薦使用Western及IP細(xì)胞裂解液(P0013)，該裂解液已被國(guó)內(nèi)各大研究機(jī)構(gòu)廣泛使用，用戶(hù)普遍反映很好。裂解細(xì)胞或組織后，沒(méi)有非常粘滯的透明狀DNA團(tuán)塊形成，不必采用超聲處理等就可以非常理想地用于后續(xù)操作。另外該裂解液裂解的產(chǎn)物也適合用于磷酸化蛋白的Western檢測(cè)。對(duì)于某些特殊蛋白的IP，如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細(xì)胞裂解液(P0013)效果不是非常理想，可以嘗試用RIPA裂解液(強(qiáng)、中或弱)或NP-40裂解液。如果發(fā)現(xiàn)IP的時(shí)候背景很高，即非特異的蛋白也被IP下來(lái)，則需要選用裂解強(qiáng)度較高的裂解液，例如RIPA裂解液(強(qiáng)或中)。如果發(fā)現(xiàn)目的蛋白無(wú)法被IP下來(lái)，則說(shuō)明裂解液的強(qiáng)度過(guò)強(qiáng)，可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。對(duì)于某些難溶解蛋白的Western，如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細(xì)胞裂解液(P0013)效果不是非常理想，可以嘗試使用裂解強(qiáng)度更高的裂解液例如RIPA裂解液(強(qiáng)、中)或SDS裂解液。

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